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      上海染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP)

      產(chǎn)品簡(jiǎn)介

      研究蛋白質(zhì)與DNA在染色質(zhì)環(huán)境下的相互作用是闡明真核生物基因表達(dá)機(jī)制的基本途徑。上海染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP)是目前*研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法。

      產(chǎn)品型號(hào):
      更新時(shí)間:2023-08-28
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      上海染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP)

            研究蛋白質(zhì)與DNA在染色質(zhì)環(huán)境下的相互作用是闡明真核生物基因表達(dá)機(jī)制的基本途徑。染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)是目前*研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法。它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物,并將其隨機(jī)切斷為長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后通過(guò)免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體,特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DN***段,通過(guò)對(duì)目的片斷的純化與檢測(cè),從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。CHIP不僅可以檢測(cè)體內(nèi)反式因子與DNA的動(dòng)態(tài)作用,還可以用來(lái)研究組蛋白的各種共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系。

      上海染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP)
      實(shí)驗(yàn)操作流程:
      1、樣品準(zhǔn)備與交聯(lián)
      細(xì)胞收集后,用37%的formaldehyde處理細(xì)胞,交聯(lián)核酸與DNA結(jié)合蛋白;
      2.超聲打斷染色質(zhì)
      裂解細(xì)胞,用Bioruptor將染色質(zhì)超聲破碎成200-1000bp片斷;將片段分為兩份,一份用于免疫共沉淀,一份用于對(duì)照。
      3、免疫共沉淀(IP) 

      取B步驟所得一份片斷與ChIP特異抗體結(jié)合進(jìn)行免疫共沉淀,利用免疫磁珠法富集抗體復(fù)合物。
      4、解交聯(lián)及純化DNA
      將富集的DNA/蛋白復(fù)合物解交聯(lián)釋放DNA片段,并進(jìn)行純化(IP DNA);B步驟所得用于對(duì)照(Input DNA)的片斷作不進(jìn)行IP實(shí)驗(yàn),但也要解交聯(lián)并純化。
      5DNAPCR擴(kuò)增
      針對(duì)ChIP DNA, Input DNA及對(duì)照DNA的目的片段設(shè)計(jì)特異性引物并進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。
       6、結(jié)果分析
      %Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×
      Fold Enrichment = [%(ChIP/Input)] / [%( Negative control/Input)]

      實(shí)驗(yàn):

      1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析

      2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq

      3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM

      4.基因檢測(cè):DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR

      5.蛋白質(zhì)檢測(cè):Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA

      6.病理檢測(cè):HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選

      7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR

      8.細(xì)胞及動(dòng)物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建

      9.

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