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    1. 產(chǎn)品中心

      Product Center

      當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心實(shí)驗(yàn)檢測服務(wù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)ROS活性氧檢測技術(shù)實(shí)驗(yàn)

      ROS活性氧檢測技術(shù)實(shí)驗(yàn)

      產(chǎn)品簡介

      ROS活性氧檢測技術(shù)實(shí)驗(yàn)介紹

      活性氧(ROS)是細(xì)胞代謝副產(chǎn)物,在細(xì)胞信號傳導(dǎo)中起作用,過量則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞損傷并與多種疾病相關(guān),檢測ROS水平對理解細(xì)胞生理功能和細(xì)胞損傷至關(guān)重要。

      產(chǎn)品型號:
      更新時(shí)間:2025-04-27
      廠商性質(zhì):代理商
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      活性氧(ROS)檢測技術(shù)實(shí)驗(yàn)是通過多種方法測量細(xì)胞內(nèi)或組織內(nèi)ROS水平的關(guān)鍵手段,其核心原理基于ROS與特定探針的氧化反應(yīng)生成可檢測信號。以下是詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及注意事項(xiàng):

      一、常用檢測方法

      1. 熒光探針法(DCFH-DA法)

        • 原理:DCFH-DA穿透細(xì)胞膜后,被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解為無熒光的DCFH,后者被ROS氧化生成綠色熒光的DCF。熒光強(qiáng)度與ROS水平成正比

        • 儀器:流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡、熒光分光光度計(jì)或熒光酶標(biāo)儀

        • 激發(fā)/發(fā)射波長:不同試劑盒參數(shù)略有差異,常見激發(fā)波長488-502 nm,發(fā)射波長525-530 nm

      2. 組織及液體樣本檢測

        • 組織樣本:使用008 ROS探針(紅色熒光,激發(fā)/發(fā)射波長510/610 nm),需優(yōu)先使用新鮮組織,凍存樣本可能導(dǎo)致ROS損失

        • 液體樣本:采用BBoxiProbe® O11探針(綠色熒光,激發(fā)/發(fā)射波長488/516 nm),適用于細(xì)胞培養(yǎng)基等液體環(huán)境

      3. 線粒體特異性檢測

        • 使用高內(nèi)涵儀器結(jié)合化合物(如魚藤酮)干預(yù)線粒體功能,或采用MitoSOX Red探針(紅色熒光)靶向線粒體超氧化物

      4. 其他方法

        • 電子順磁共振(EPR) :檢測O??、·OH等自由基,需結(jié)合自旋捕獲技術(shù)

        • 化學(xué)發(fā)光法:利用Lucigenin等探針檢測超氧化物,無需激發(fā)光源


      二、實(shí)驗(yàn)步驟(以DCFH-DA法為例)

      1. 樣本準(zhǔn)備

        • 細(xì)胞類型:貼壁或懸浮細(xì)胞需調(diào)整探針裝載方式。貼壁細(xì)胞建議檢測時(shí)匯合度達(dá)50-70%

        • 組織樣本:優(yōu)先使用新鮮組織,凍存樣本需驗(yàn)證ROS殘留量

      2. 探針裝載

        • 濃度:DCFH-DA工作液通常為5-20 μM(按1:250至1:1000稀釋母液)

        • 孵育條件:37℃避光孵育20-40分鐘,懸浮細(xì)胞需后續(xù)洗滌去除未進(jìn)入探針

        • 順序調(diào)整

      • 短刺激(<4小時(shí)):先裝載探針,后處理細(xì)胞

      • 長刺激(>4小時(shí)):先處理細(xì)胞,后裝載探針

      1. 檢測與參數(shù)設(shè)置

        • 儀器選擇:根據(jù)樣本量選擇熒光酶標(biāo)儀(高通量)或共聚焦顯微鏡(亞細(xì)胞定位)

        • 陽性對照:使用Rosup(50-100 mM)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)有效性

      2. 數(shù)據(jù)分析

        • 熒光強(qiáng)度通過軟件(如ImageJ)量化,對比處理組與對照組的差異


      三、注意事項(xiàng)

      1. 樣本處理

        • 避免反復(fù)凍融,尤其是組織樣本,否則ROS易降解

        • 檢測前用無血清培養(yǎng)基或PBS清洗細(xì)胞,減少背景干擾

      2. 實(shí)驗(yàn)條件控制

        • 溫度:光照實(shí)驗(yàn)需控制溫度在20-29℃,避免溫度波動(dòng)影響ROS生成

        • 避光操作:探針及樣本需全程避光,防止熒光淬滅

      3. 探針優(yōu)化

        • 根據(jù)細(xì)胞類型調(diào)整探針濃度,避免濃度過高導(dǎo)致毒性或背景信號

        • 縮短探針裝載后至檢測的時(shí)間(建議<1小時(shí)),減少假陽性

      4. 質(zhì)量控制

        • 設(shè)置無探針對照組、陽性對照組(Rosup)及空白組,排除自發(fā)熒光影響


      四、應(yīng)用場景

      • 疾病機(jī)制研究:如氧化應(yīng)激與神經(jīng)退行性疾病、癌癥的關(guān)系

      • 藥物評價(jià):通過ROS水平變化評估藥物抗氧化效果

      • 環(huán)境毒理學(xué):檢測污染物(如紫外線、化學(xué)物質(zhì))誘導(dǎo)的ROS累積


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