細胞分選實驗

實驗原理

流式細胞分選是利用流式細胞分選儀，對細胞的物理、生理、生化、免疫、遺傳、分子生物學性狀及功能狀態等進行定性或定量檢測，它可根據發射光的熒光強度和波長將發光顆粒亞群分開并可實現單克隆分選，對復雜樣本中的細胞進行鑒定、分類、定量和分離。免疫磁珠細胞分選是把細胞用超級順磁性的 MACS MicroBeads （MACS微型磁珠）特異性地標記，磁性標記完后，把這些細胞通過一個放在強而穩定磁場中的分選柱。分選柱里的基質造成一個高梯度磁場。被磁性標記的細胞滯留在柱里而未被標記的細胞則流出。當分選柱移出磁場后，滯留柱內的磁性標記細胞就可以被洗脫出來，這樣就*可以獲得標記和未標記的兩個細胞組份。

 實驗流程

流式細胞分選

(1)取1式細胞⁵個待檢測的細胞，加5 ml DPBS洗滌，室溫2000 r/min離心5 min，棄上清，然后用200 μl 0.5% BSA-DPBS重懸細胞；

(2)想細胞懸液中加入熒光染料標記的抗體，4℃孵育30 min；

(3)將染好的細胞用0.5% BSA-DPBS 洗滌兩次，然后用500 μl 0.5% BSA-DPBS重懸，流式細胞儀檢測；

(4)結果統計分析。

磁珠細胞分選方法

(1)離心收集待分離細胞，用少量PBE孵育液（0.5%BSA、0.08%EDTA，PH7.2），真空抽濾除菌及液體內氣體，充分混懸細胞（0.5 ml/1及液體⁸細胞），加入一抗（10-20 μg/ml終濃度），4℃孵育30 min；

(2)用20倍體積PBE洗細胞一次，再加PBE（0.3 ml/1/ml⁸細胞）充分混懸細胞后，加入相應二抗包被的超微磁珠，混勻后置8~15℃孵育10~15 min；

(3) 將分離柱安裝入磁場中，加入0.5 ml PBE，在重力作用下自然流盡,以預處理分離柱。

服務說明

(1)客戶提供：待檢測細胞，分選細胞種類。

(2)公司提供：基本實驗步驟、圖片、數據分析結果。

(3)實驗周期：2-3w，具體需要根據細胞生長情況及實驗內容而定。