免疫熒光組化操作流程 （石蠟切片）

免疫熒光組化操作流程 (石蠟切片)

1、3μm石蠟切片貼在涂有切片粘合劑的干凈載玻片上,57℃烤4-18h;

2、石蠟切片常規脫蠟至水，0.01mol/L pH7.3 PBS洗3min×3;

3、抗原修復:0.02mol/L pH6.0 CB(檸檬酸鹽緩沖液),微波98℃(Ⅲ檔)15min,自然冷卻20min;0.4%胃蛋白酶消化40min,at

37℃ ；

4、0.01mol/L pH7.3 PBS洗3min×3;

5、加一抗PGP9.5 1:100； 37℃溫孵2h,

6、0.01mol/L pH7.3 PBS洗3min×3;

7、加二抗（FITC標記） 1:200室溫溫孵2h;

8、0.01mol/L pH7.3 PBS洗3min×3;

9.蒸餾水洗3min,

10、DAP-I和封片增強劑（Sigma公司）封片;-20℃保存待共聚焦觀察。