ELISA免疫測定，實驗技巧！！

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)域。在臨床檢驗中主要通過抗原抗體反應(yīng)檢測體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。

ELISA免疫測定目的是？

1.測定體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等；

2.測定激素，包括小分子量的甾體激素等；

3.測定抗生素和藥物；

4.測定病原體抗原，HBsAg、HBeAg等；

5.利用純化的抗原檢測標本中的抗體，例如抗-HBs等；

ELISA免疫測定原理

①使抗原（或抗體）結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；

②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標 抗原（或抗體），而且此酶標抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；

③測定時將受檢標本（抗體或抗原）和酶標抗原（或 抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應(yīng)，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質(zhì)分開，后結(jié)合 在固相載體上的酶量與標本中受檢的抗體或抗原量成比例；再加入酶反應(yīng)底物后，底物被酶催化后變?yōu)橛猩a(chǎn)物，根據(jù)其顏色反應(yīng)的 深淺進行定性或定量分析，以了解被測標本中抗體或抗原含量。

ELISA免疫測定步驟

1.　包被；

2.　加樣：加稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)；

3.　加酶標抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鐘；

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml；

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值。

ELISA免疫測定流程圖

ELISA免疫測定流程圖